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Caspase 3检测试剂盒(分光光度法)图片
产品货号:
KFS198
中文名称:
Caspase 3检测试剂盒(分光光度法)
英文名称:
Caspase-3 Colorimetric Assay Kit
产品规格:
20T|50T|100T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本试剂盒适用于培养细胞及新鲜组织caspase-3检测。


将caspase-3序列特异性的多肽偶联至发色基团。当该底物被Caspase-3剪切后,发色基团即游离出来,可通过酶标仪或分光光度计(λ=405nm或400nm)测定其吸光值,考察caspase-3的活化程度。


Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用,其中caspase-3为关键的执行分子,与DNA断裂、染色质凝聚和凋亡小体形成有关。Caspase-3在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中,没有活性;但在细胞发生凋亡阶段,它被激活,活化的Caspase-3由两个大亚基和两个小亚基组成,裂解相应的胞浆胞核底物,最终导致细胞凋亡。


组分20T50T100T保存
Lysis Buffer5.0mL10.0mL20.0mL2~8℃
2×Reaction Buffer1.0mL2.5mL5.0mL
Caspase-3 Substrate100μL250μL500μL-20℃,避光
100mM DTT60μL130μL250μL

保存:-20℃,避光,有效期1年。


低温高速离心机、酶标仪或分光光度计(100μL的比色皿)(λ=405nm或400nm)、微量移液器、玻璃匀浆器(组织样本);
1.5mL Microtube、PBS、蛋白定量试剂(可选购Bradford蛋白含量检测试剂盒,货号:KFS437)及仪器。


  1. Caspase-3 Substrate避光保存及使用。
  2. 对某些凋亡诱导剂引起的细胞凋亡可能存在非依赖于Caspase-3活化的机制,这种情况时利用本试剂盒检测Caspase-3活性无明显改变,需要考虑凋亡机制中的其他信号通路。
  3. 细胞数量需达到3~5×106个或新鲜组织50~100mg,以便能达到测定需要的100~200μg蛋白的要求,因为Caspase-3的活性与细胞裂解液的蛋白含量有关,如测定的OD值偏低,可通过增加细胞数量或组织量的方法来提高蛋白量。



  1. 样品裂解
    1. 细胞裂解方法
      1. 用适当的方法诱导细胞凋亡,同时设立阴性对照组,并收集细胞;
      2. 用PBS洗涤细胞二次(离心2000rpm,5min)收集3~5×106个细胞,尽量去除PBS上清;
      3. 在收集的沉淀细胞中加入150~200μL冰冷Lysis Buffer;
        注意:使用前每50μL Lysis Buffer加入0.5μL DTT),吹打均匀。
      4. 置冰上裂解20~60min,其间涡旋振荡3~4次,每次10 s;或冻融2~3次;
      5. 4℃,离心(10000rpm) 1min;
      6. 小心吸取上清(含裂解的蛋白质)转移至新的管中,并放置冰上待用;
      7. 取少量上清(1~2μL),常规方法(Bradford法)测定其中的蛋白浓度。
    2. 组织裂解方法
      1. 每50~100mg固体组织置于培养皿中,手术剪剪碎成3mm×3mm左右的小块,加入150~200μL冰冷Lysis Buffer(注意:使用前每50μL Lysis Buffer加入0.5μL DTT),玻璃匀浆器上下手动匀浆15次,注意低温操作;
      2. 取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管,10000转/分,4℃离心5min;
      3. 小心吸取上清(含裂解的蛋白质)转移至新的管中,并放置冰上待用;
      4. 取少量上清(1~2μL),常规方法(Bradford法)测定其中的蛋白浓度。
  2. Caspase-3检测
    1. 吸取50μL含100~200μg蛋白的细胞或组织裂解上清;如体积不足50μL用10mM PBS,pH7.2~7.6补足至总体积50μL(各组均采用同样的蛋白量进行测定和比较);
    2. 加入50μL的2×Reaction Buffer;
      注意:使用前每50μL 2×Reaction Buffer加入0.5μL DTT。
    3. 加入5μL Caspase-3 Substrate并于37℃避光孵育4小时;
    4. 用酶标仪或分光光度计(100μL的比色皿)在λ=405nm或400nm测定其吸光值。通过计算OD诱导剂/OD阴性对照的倍数来确定凋亡诱导剂组Caspase-3活化程度。
      注意:以10mM PBS,pH7.2~7.6和Reaction Buffer作为空白对照。(50μL PBS + 50μL 2×Reaction Buffer)



用凋亡诱导剂诱导JK细胞凋亡,在37℃,5% CO2培养箱培养6h后,按照说明书的操作步骤进行试验,结果如下图所示。
Caspase 3分光光度法检测试剂盒
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